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实验室小强
君君，最近要做裸鼠皮下荷瘤实验了，但是我没经验，慌得一批。
中洪君
别慌，让君君来传授你几招裸鼠皮下荷瘤实验秘诀，保证你用得上！
皮下荷瘤定义
肿瘤细胞系移植到同种或异种动物的皮下形成肿瘤块，荷瘤是将肿瘤细胞移植到小鼠体内的专业说法，皮下荷瘤属于肿瘤细胞系移植模型（CDTX），CDTX还包括各种转移模型荷瘤、原位荷瘤等。
皮下荷瘤应用
一般用于抑制肿瘤生长（细胞增殖）的药物的筛选检测。如果单独研究肿瘤在小鼠体内的生长，那么几乎所有的肿瘤均可通过皮下荷瘤进行实验研究。
该模型优点：
①该模型操作简单方便,可以直观观察肿瘤的生长，方便检测动物体重、肿瘤生长曲线、肿瘤重量等重要数据；
②可以对组织和体液样本进行相关分析，广泛应用于生物医学研究与药物开发。
1、肿瘤细胞系的选择
肿瘤细胞株的选择，是一个很麻烦的问题，却是最重要的问题。有以下几点要求：
①不同肿瘤细胞系的成瘤率不同，需选取成瘤率高的细胞系；如乳腺癌细胞MCF-7，虽在体外应用多，但体内成瘤率差，生长慢，因此一般不选用；
②肿瘤细胞根据分子标记分为多种，考虑成瘤率外，选择时还需考虑实验目的，如针对药物靶点HER2，需要选择HER2高表达的肿瘤细胞如SKBR-3，而不是HER2阴性的MDA-MB-；再如研究靶向kras突变肿瘤的药物，我们选取kras突变的（其突变类型又属于突变率比较高的），又易培养且成瘤率好的A。
③实验用肿瘤细胞株多为人源或鼠源细胞系，根据实验目的选择，一般鼠源细胞系更易荷瘤，但是人源细胞系会更贴近人类肿瘤生长情况。
2、细胞接种量
如果不好确定该肿瘤细胞接种量，可查找文献进行参考。皮下荷瘤细胞数量/体积可1-5*10^6／0.1ml/注射点的范围内选择。注射体积ul或ul均可，超过ul可能会漏液。
3、裸鼠
裸鼠选择4-8周龄，体重18-20g左右，同批实验鼠要保证个体差异小。
裸鼠性别一般雌雄均可，但临床上跟性别相关性大的肿瘤细胞则需要进一步选择裸鼠性别，比如乳腺癌细胞选择雌雄，前列腺癌细胞选择雄性。
4、接种操作
1，接种前避免激烈震荡细胞，可用移液枪将细胞悬液轻轻地充分吹散，防止细胞成团而降低细胞成活率。
2，种植部位选择供血丰富区域，如腋窝中后部、腹股沟中上部等。
3，接种前用75％酒精棉球对进针部位擦拭消毒。
4，抓取小鼠时皮肤不必绷得太紧,平展即可。
5，接种时，针头在皮下进针约1cm深；针头扎入小鼠皮下后，针头稍微动一动，明确针头在皮下后方可注射，绝不可刺破皮肤或者刺破肌肉层。注射速度不宜太快。
下面为皮下荷瘤视频（包括各个部位的注射手法）
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皮下荷瘤的几点问答
（1）瘤子长不出来是怎么回事？
一方面可能是细胞状态差，活力不好，或是肿瘤细胞不易成瘤，需加入Matrigel辅助或增大接种量或更换细胞系；一方面可能是小鼠周龄太大，或小鼠免疫排斥，建议更换免疫缺陷程度更大的小鼠（Nod-scid小鼠，NOG小鼠＞Nude裸鼠）
（2）小鼠瘤子长起来又消失？
肿瘤块先缩小，后变大很常见，很可能是炎症反应，肿瘤细胞被小鼠自身吸收，继续观察肿瘤细胞吸收之后是否经过几周还能长出来，长不起来建议换鼠。
（3）均一性很差，肿瘤体积差距较大？
如果荷瘤分组发现小鼠肿瘤体积差距很大，这可能跟小鼠周龄及接种细胞量不一致导致，建议重新做实验分组。
（4）是否可以在一只小鼠进行多个点荷瘤？
不可以，一只老鼠就只能接种一个点。因为一个老鼠身上有多个肿瘤块的情况下，可能会相互影响。
（5）是否应用免疫抑制剂加速肿瘤生长？
如果裸鼠荷瘤不生长，可以参考文献，用免疫抑制剂如环磷酰胺（抑制裸鼠NK细胞活性）促进生长；不过最好不要为了缩短造模周期来加速生长，因为可能会造成溃烂，这样就不得不中止实验。所以一般情况下，应尽量符合细胞系本身的生长特性，不应过多地人为的干扰。
皮下荷瘤实验介绍就到此结束了，原来看似简单的实验却有多种不可忽视的因素需要考虑。简单回顾一下，皮下荷瘤模型中细胞系和小鼠品系是最需要考虑的两大因素，切记一定要多查阅文献并结合预实验，进而找到最合适的皮下肿瘤模型。
做实验，找中洪博元
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